Hamburger ekmeği hamuru genellikle oda sıcaklığında ilk mayalanma için 45–60 dakika bekletilir ve hacminin yaklaşık iki katına çıkması hedeflenir. Şekil verildikten sonra ise ikinci mayalanma süreci ortalama 30–45 dakika sürer ve bu aşama ekmeğin daha yumuşak ve pofuduk olmasını sağlar. Ortam sıcaklığı, kullanılan maya türü ve hamurun içeriği (süt, şeker, yağ oranı gibi) mayalanma süresini doğrudan etkileyebilir. Genel olarak hamburger ekmeği için toplam mayalanma süresi 1,5–2 saat arasında değişir.